您当前的位置:首页 > 技术中心 > 产品知识 > 水体中粪大肠菌群的常见检测方法

水体中粪大肠菌群的常见检测方法

  水是人类赖以生存的基础,随着人类社会生产的发展和技术的进步,水质污染现象日趋严重。病原微生物污染是我国水体污染的主要原因之一。污染水体的病原微生物种类繁多,而粪大肠菌群是水体粪便污染的指示菌,通过监测该项目可以准确的判断监测水域内污染程度,有效预报和控制流行疾病的发生与传播。

  常见的粪大肠菌群检测方法如下:

  1、多管发酵法

  通过将污染水样接种入多根试管中进行恒温培养,利用大肠菌群繁殖时使乳糖发酵,并能使乳糖蛋白胨培养液变黄,同时产生气泡的特有现象,根据不同接种量的发酵管所表现阳性结果的数目,从MPN表中查的相应的MPN指数,计算每升水中粪大肠菌群的最近似值。

  2、滤膜法

  将水样注入已灭菌的放有孔径为0.45μm滤膜的滤器中,经过抽滤,将细菌截留在膜上,然后将滤膜贴于M-FC培养基上,经44.5℃温度下进行培养,计数培养基上呈蓝色或蓝绿色的菌落,计算出每升水的粪大肠菌数。

  3、纸片法

  采用纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体,将特定的培养基和显色物质附着在上面,通过粪大肠菌群在上面的生长、显色来测定的方法,即粪大肠菌在纸片培养基上呈红色菌落,菌落周围产生黄圈是粪大肠菌分解乳糖产酸使指示剂变色的结果。

酶底物法测水中粪大肠菌群

   4、酶底物法

  将加入酶底物检测试剂的100ml水样注入51孔或97孔的定量测量盘中进行密封后培养,由于大肠菌群细菌能产生一种β-半乳糖苷酶分解PG使得培养液呈黄色,同时大肠埃希氏菌可以产生葡萄糖醛酸酶分解MUG,培养液将会在波长366nm紫外光下产生荧光反应。通过计算有黄色反应和荧光反应的孔穴数,可对照MPN表查出其代表的粪大肠菌群最可能数。

  5、聚合酶链式技术

  提取粪大肠菌群混悬液和待测水样的DNA,利用PCR技术扩增编码约260bp的LacZ基因(β-半乳糖苷酶基因)和约150BP的UdiA基因(β-D-半乳糖苷酶基因)的DNA片段,分别检测大肠菌群数和大肠杆菌。

  6、荧光原位杂交技术

  由于粪大肠菌群特异的DNA序列,借助荧光标记的特异寡聚核苷酸片段作为的探针与待测水样中的DNA分子杂交,将杂交细胞经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量分析,确定菌群数。

  目前,大肠菌群检测方法发展很快,已提高到分子生物学水平,使检测更快速、准确。酶底物法以其操作简便、检测周期短,将取代多管发酵法、滤膜法等传统方法,尤其是酶底物法采用密封培养技术,在检测医院污水时可以减少人员接触而降低检测人员的致病风险,因此具有更强的实用价值和应用价值,正是目前水质微生物污染的快速检测标准方法之一。

收缩