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酶底物法检较脏水样中大肠菌群时的稀释要点

    微生物检测中,当水体污染严重的水样检测结果超出检测限时,我们就要对水样进行稀释。即便采用定量范围最大的酶底物法,也要对较脏的地下水或排污口的水样稀释100倍甚至1000倍。因此,掌握水样稀释时的注意事项尤为必要。

   【取样量大】稀释时,应确保取样量大。譬如10倍稀释:取10ml原液+90ml无菌水配成100ml 10倍稀释液①。如果稀释100倍甚至1000倍,则进行梯度稀释。由①中的10倍稀释样再取10ml,并加入90ml无菌水,便完成了100倍的稀释。以此类推,从100倍稀释样中取出10ml,加入90ml无菌水完成1000倍稀释。
   【取样均匀】取样的均匀程度对稀释结果产生直接影响。因此,我们每次取样前,必须充分摇匀原液以保证取样均匀。
   【做平行样】为确保数据更加稳定并接近真实值,建议每个梯度稀释做平行样。譬如,我们可以取20ml原液+180ml无菌水配成200ml 10倍稀释样,或者取30ml+270ml无菌水配成300ml 10倍稀释样,以此类推做梯度稀释。一般在未知样且浓度预计很高时采用这个方法,可以确保每个梯度至少有一个样。若对水样来源及浓度有了大致的了解,可直接梯度稀释到我们要的浓度,并做2-3个平行样。
    微生物实验的不稳定性会对水样稀释有一定的影响。我们要做的就是掌握水样稀释的注意事项以尽量减少误差。

 

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