酶底物法测定地表水中粪大肠菌群的研究

    地表水中粪大肠菌群是评价水质受粪便污染程度的重要指标之一，传统上多采用滤膜法或多管发酵法进行检测。但以上两种方法检测耗时较长（48小时左右），实验步骤繁琐。酶底物法可以较好地弥补传统方法的不足，对水质状况做出快速检测。
    一、实验材料
    酶底物试剂;100mL无菌取样瓶(里面装有1.5%的硫代硫酸钠，用于去除水样中的余氯);无菌培养定量盘(5l孔);LK-2014智能程控定量封口机(带5l孔定量盘橡胶托垫);51孔阳性标准比色盘;便携式培养箱。
    二、实验原理
    在培养温度为44.5±1℃条件下，粪大肠菌群细菌能特异性地产生β—半乳糖苷酶（β—D—galactosidase)，该生物酶可以分解ONPG(Ortho—nitrophenyl—β—D—Ralactopyranoside，β—半乳糖醛苷)，使培养液呈黄色。
    三、实验步骤
    1、用100mL无菌取样瓶取100mL混匀水样。如果水样中粪大肠菌群数大于2005个/L，则酌情少取，并用新配置的超纯水稀释至100mL刻度线。
    2、将酶底物试剂加入取样瓶中，充分摇匀，使试剂完全溶解。
    3、水样溶解完全后倒入无菌培养定量盘(51孔）。
    4、51孔定量盘橡胶托垫在封口机上进行封装。
    5、51孔定量盘封装好后放入44.5±1℃恒温培养箱中培养24h。
    6、24小时后，将51孔定量盘从培养箱中取出，与5l孔阳性标准比色盘进行比较（黄色孔颜色比51孔阳性标准比色盘深的表明为阳性反应)。根据51孔定量盘上的阳性孔数，对照MPN表查出结果。
    四、统计学分析
    数据的整理统计使用execl软件进行。
    五、结果与讨论
    对同一地表水样进行l~200倍不等的稀释时，测定结果范围在4000个/L-8260个/L之间，偏差较大。
    测定结果如表1及图1所示。

    由表1和图1可以看出，水样不稀释或者稀释两倍时，51孔定量盘的阳性孔数为51孔，表明该水样的粪大肠菌群浓度大于2005个/L；对水样进行4倍或5倍的稀释培养检测时，51孔定量盘的阳性孔数分别为50孔和49孔，测定结果值为8020个/L和8260个/L，两者的平均偏差为1.5%。该结果与传统的多管发酵法的实验结果具有较好的一致性，结果可信。
    而在对该水样进行10~200倍不等的稀释时，检测结果值在7820个/L-4000个/L之间，结果均偏低。由此可见，随着稀释倍数的增大，测定结果值越偏低。因此，在日常检测工作中，检测人员应根据具体情况对水样进行最小倍数的稀释。
    六、结语
    测定水样中的粪大肠菌群数时，酶底物法具有简便、快速、准确的特点。无需无菌室，无需配置培养基，无需清洗玻璃器皿，24小时便可出结果，能够较为准确地判断水样的污染状况。同时，测定水样的稀释倍数会对测定结果有一定的影响。检测人员可根据具体情况对水样进行最小倍数的稀释，以使结果更加真实准确。